前 言
2025年版《中国药典》将于10月1日起正式实施，在生物制品质量控制及病毒安全性评价方面做出了关键修订，对推动生物医药行业发展十分重要。
在保持与国际接轨的基于WHO、ICH等国际相关指导原则的变化趋势，结合我国生物制品发展的需求，“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制”部分被拆分为两部分：“生物制品生产用动物细胞基质制备及质量控制（通则0234）”和“生物制品检定用动物细胞质量控制（通则0235）”。
通则0234新增昆虫细胞的适用范围，加入风险评估策略，优化细胞库检定项目，并在传统检测方法基础上新增病毒核酸扩增方法或NGS（下一代测序或高通量测序）法作为补充或替代的内容，提升检测的科学性、合理性和安全性。
通则0235在2020年版版药典内容基础上，新增了针对特定基因修饰细胞的具体检测要求，涵盖构建过程、特征鉴别、使用代次内稳定性等方面，满足产业发展需要。
为更好的遵循监管要求进行药品的研制、生产和质量管理，义翘神州将与大家一起对2025年版《中国药典》“通则0234”和“通则0235”的变化进行详细解读。我们先解读“细胞检定”项目要求的变化。
注：以下内容中，绿色字体表示更改内容，红色字体为新增内容。
一、细胞检定项目要求的总体变化与解读1细胞检定2025年版药典：细胞检定主要包括以下几个方面：细胞鉴别、外源因子和内源因子的检查、成瘤性/致瘤性检查等。必要时还须进行细胞生长特性、细胞染色体检查、细胞均一性及稳定性检查。这些检测内容对于MCB细胞和WCB细胞、生产终末细胞（EOPC）或生产限定代次细胞均适用。
修改说明：增加生产限定代次细胞可代替生产终末细胞（EOPC）
2细胞检定项目要求2025年版药典：应对细胞来源、培养及建库过程进行风险评估，并制定检定策略。通常应至少对MCB细胞及EOPC细胞或生产限定代次细胞进行一次全面检定， WCB细胞进行部分检定。如对MCB细胞不能进行全面检定，可对WCB细胞进行全面检定，后续建立的WCB细胞可通过评估后进行部分检定。当生产工艺发生变更时，需经评估，必要时应重新对EOPC细胞或生产限定代次细胞进行检测。细胞检定的基本要求见表1。
修改说明：
1. 增加需根据风险评估制定检定策略；
2. 增加生产限定代次细胞可替代EOPC进行全检；
3. 增加WCB全检可替代MCB
4. 增加生产工艺变更时，可经评估是否重新检测。
解读：
· 检定策略制定中引入风险评估的理念
· 明确了主库、工作库的检定策略
· 某些细胞治疗产品（干细胞、CAR-T细胞等）MCB数量是有限的，进行WCB全检对样品量具有挑战性，可WCB全检替代MCB
· 不是所有的工艺变更都要复检EOPC，需要经过评估后确定是否需要复检
表1：细胞检定的基本要求
注：“+”为必检项目，“-”为非强制检定项目，（+）表示需要根据细胞特性、传代历史、培养过程等情况评估后进行的检定项目。
a. EOPC，是指达到或超过生产末期时收获的细胞，尽可能取按生产规模制备的生产末期细胞。
b. 对分枝杆菌易感的细胞进行该项检查。
c. 根据风险评估结果确定是否进行体内实验，如在建库或细胞培养过程中存在外源因子引入的风险，可进行体内实验或用经验证的NGS法替代。
d. 从MCB或WCB复苏细胞，扩增至或超过生产用细胞龄限制代次作为待检样本。
修改说明：
1. 增加生产限定代次细胞（LIVCA）可替代EOPC
2. 更改EOPC/LIVCA细胞鉴别为必检项
3. 新增螺原体检查
4. 删除细胞形态观察及血吸附试验
5. 更改MCB及EOPC/LIVCA动物和鸡胚体内接种法为可选项，且可用经验证的NGS方法替代
6. 删除染色体检查，染色体检查作为新建二倍体细胞的检测项目，不放在细胞基质总的检定要求
7. 更改EOPC/LIVCA成瘤性检查为可选项
8. 增加成瘤性/致瘤性检查待检样本要求
9. 增加稳定性检查，为可选项（原为重组细胞的特殊要求，现调整至此处）
二、细胞检定项目及方法的变化与解读1细胞鉴别
2025年版药典：细胞库（MCB和WCB）和生产终末细胞或生产限定代次细胞应进行鉴别试验，以确认所用细胞正确，且无其他细胞的交叉污染。重组细胞系的专属特性的鉴别，还应通过检测目的蛋白基因或目的蛋白进行鉴别试验。细胞鉴别试验方法有多种，包括细胞形态、生物化学法（如同工酶试验）、免疫学检测（如组织相容性抗原、种特异性免疫血清）、细胞遗传学检测（如染色体核型、标记染色体检测）、遗传标志检测［如DNA指纹图谱，包括短串联重复序列（STR）、限制片段长度多态性（RFLP PCR）和内含子多态性（EPIC-PCR）法等］以及其他方法（如杂交法、PCR法、报告基因法等）。应至少选择上述一种或几种方法对细胞进行种属和细胞株间及专属特性的鉴别。种属鉴别可依法检查（通则 3430）。
修改说明：
1. 删除“新建细胞系/株的鉴别要求”
2. 更改鉴别试验结果“确认为本细胞”为“确认所用细胞正确”
3. 更改重组细胞系的专属特性鉴别要求的位置
4. 增加种属鉴别依通则3430检查
解读：
· 种属鉴别法（通则3430），内容均为分子类方法，并提到传统的生物化学法，如同工酶法，准确性差，灵敏度低。
2细菌、真菌检查2025年版药典：分别取混合细胞培养上清液和冻存细胞管样品，依法检查（通则1101），应符合规定。对于MCB及WCB培养物，至少取混合细胞培养上清液10 ml，尽可能采用薄膜过滤法检测。对于冻存细胞，至少取冻存细胞总支数的1%或至少2支冻存细胞管（取量大者），可采用直接接种法检测。
通则1101
• 制备好的培养基若不及时使用，应置于无菌密闭容器中，在 2~25℃、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。
• 培养基无菌性检查每批随机取部分培养基。
• 方法适用性实验对大肠埃希菌敏感的抗生素类产品宜选用大肠埃希菌代替铜绿假单胞菌。
• 培养期间应定期观察并记录是否有菌生长。
• 实验室应基于质量风险管理的要求，综合评估确定日常检验过程中阳性对照试验的必要性。
修改说明：
1. 更改“细菌、真菌无菌检查”为“细菌、真菌检查”
2. 更改“取混合细胞培养上清液或冻存细胞管样品”为“分别取混合细胞培养上清液和冻存细胞管样品”
3. 培养基不需要避光保存，无菌性检查对检查数量不做规定
4. 适用性试验将大肠埃希菌替换为铜绿假单胞菌，但对大肠埃希菌敏感的抗生素类样品还需用大肠埃希菌
5. 无菌检查硫乙醇酸盐流体培养基培养置于一个温度即可
6. 增加了质量风险管理的要求，评估日常检验中阳性对照试验的必要性
解读：
· 需要做细胞培养上清液和冻存细胞管两种样品
· 与国际方法接轨，硫乙醇酸盐培养基减少为一个培养温度，阳性对照无强制要求
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