其成功的关键在于取材、成纤维细胞的排除、选用适宜的培养液和培养底物等几个方面。
在具体培养方法方面，细胞培养与正常组织细胞培养并无原则差别，初代培养应用组织块和消化培养法均可。
细胞在细胞培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。
传代培养也是一种将细胞保存下去的方法。
同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。
悬浮性细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
具体操作步骤如下：
将长满细胞的细胞培养瓶中原来的培养液弃去。
加入0.5—1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。
瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。
随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10ml培养液终止消化。
观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。
一般室温消化时间约为1—3分钟。
用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37℃下继续培养。
第二天观察贴壁生长情况。
以上是细胞培养瓶在细胞传代中的应用，消化液的配制方法如下：称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
胰酶溶液中也可加入EDTA，使终浓度达0.02％。
细胞培养瓶特征
厚度均匀，底部无畸变；
密封盖/滤膜盖（0.22μm疏水膜）；
设计的瓶盖可快速旋转；
侧面可叠放，更有效地利用培养箱；
无毒，无DNA/RAN酶；
伽马射线消毒灭菌。
培养瓶和培养皿的区别
培养瓶适合长期培养、传代、作为种子细胞。
不易污染。
培养皿和培养板适合在各种实验中选用，临时培养。
培养面积T25约为25，T75为75。
6孔板、10/孔。
12孔板4/孔。
培养瓶和培养皿的区别在于，安全系数的高低、培养细胞数量的多少。
个人感觉培养瓶的安全系数更高，操作也比较方便。
培养瓶瓶可以用来做相对大规模的培养或比较容易被污染的细胞。
而培养皿比较适合小规模的培养或做一些对照分析实验。
培养瓶主要分类
按细胞对产品的贴壁要求分为三类：
普通型适合细胞和组织的悬浮培养；
标准型具有良好的细胞贴壁性能，适用于细胞的贴壁生长；
型表面含有含氮官能团，能促进某些细胞(如细胞)的贴壁、生长和分化。
按瓶子外形分为：
宽体培养瓶；
三角培养瓶；
斜颈培养瓶。
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