检测技术服务:百泰派克生物科技BTP客户案例:利用Edman降解法对重组Der f 3的蛋白条带进行N端测序

   2023-12-13 250

检测技术服务:百泰派克生物科技BTP客户案例:利用Edman降解法对重组Der f 3的蛋白条带进行N端测序--检测技术服务详情

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期刊:Molecular immunology;影响因子: 4.2397

原文链接:DOI: 10.1016/j.molimm.2019.02.018

研究对象:气道上皮细胞

研究目的:Der f 3对气道上皮屏障影响及诱导炎症的分子途径研究

研究手段:N端Edman测序等

研究内容及结论:过敏原的蛋白酶活性被认为参与了过敏性疾病的发病机制。来自粉尘螨(Dermatophagoides farinae)的主要过敏原Der f 3具有丝氨酸蛋白酶活性,但其免疫发病机制尚不清楚。该研究旨在探讨Der f 3对气道上皮屏障的影响,以及其诱导炎症的分子途径。采用检测支气管气道上皮细胞(AEC)中天然Der f 3和热灭活(H)Der f 3的差异表达基因,并结合实时荧光定量PCR(RT-PCR)和ELISA进行验证。与其他蛋白酶过敏原(如在AECs中诱导Th2促进警报素(IL-25、IL-33、TSLP))不同,Der f 3诱导促炎细胞因子和趋化因子包括IL-6、IL-8和GM-CSF,它们已知促进Th17反应。这些促炎介质是由Der f 3通过MAPK和NF-κB通路以及存储操作的钙信号通路诱导的。A549和BEAS-2B细胞的小干扰RNA沉默表明,Der f 3对AECs的激活主要依赖于蛋白酶激活受体2(PAR-2),而PAR-1也是AECs完全激活所必需的。PAR-1

3491966189.jpg和PAR-2的双敲除在很大程度上损害了Der f 3诱导的IL-8的产生和随后的信号通路。该研究的数据表明,Der f 3通过PARs-MAPK-NF-κB轴诱导人上皮细胞系中的促炎介质。该研究结果提供了Der f 3可能触发倾斜于Th17的对室内尘螨过敏反应的分子机制。

利用Edman降解法对重组Der f 3的蛋白条带进行N端测序,该服务由北京百泰派克生物科技提供。序列分析结果表明重组的Der f 3在渗析后达到成熟。

参考文献:Li B, Zou Z, Meng F, et al. Dust mite-derived Der f 3 activates a pro-inflammatory program in airway epithelial cells via PAR-1 and PAR-2[J]. Molecular immunology, 2019, 109: 1-11.

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