斯派克SPECTRO光谱仪维修:获取和解释稳态光谱荧光并不总是那么简单。下面我们就常见问题提供一些建议,以帮助您优化 斯派克SPECTRO 光谱仪的操作。
如果您的荧光光谱失真、显示意外的峰或阶跃该怎么办
如果您的荧光光谱出现问题,请确保启用了单色器滤光轮。单色仪以其所选波长的倍数传输波长,这些波长需要被滤除。例如,300 nm 的散射激发波长进入发射单色器将导致在 600 nm 处检测到一些光。斯派克SPECTRO 光谱仪具有自动滤光轮以消除这些二阶效应,但如果在软件中禁用了滤光轮,则可以使用它们。
确保光谱校正在控制软件中处于活动状态。斯派克SPECTRO 荧光光谱仪允许自动校正光谱,以考虑检测灵敏度和激发光强度。
来自溶剂或底物的拉曼峰通常可以在发射荧光光谱中看到。识别拉曼信号的一种快速方法是改变激发波长:拉曼峰应向同一方向移动。拉曼信号也应该出现在溶剂或底物的“空白”测量中。
检查内部过滤效果。
如果荧光发射太低怎么办
如果荧光发射太低,通过目测光束撞击样品的位置来检查样品的对齐情况。这对于固体样品尤其重要。一些样品架允许同时调整位置和监测荧光信号。
降低样品浓度以检查内部过滤效果。
增加光谱带通。如果研究发射,则增加激发带通,反之亦然,以避免失去测量光谱的分辨率。
如果测量低排放样品,必须增加积分时间以获得高质量数据。建议使用更短的停留时间(0.1 或 0.2 s)和更多的扫描次数,以便查看整体光谱并纠正实验条件下的潜在漂移。
探测器饱和度
在高强度下,PMT 探测器无法对所有光子进行计数,并且仪器的灵敏度不再是线性的。这称为检测器饱和。虽然它可能不会损坏探测器(至少在中等强度下),但它会导致光谱失真,因此必须避免。饱和极限取决于 PMT 检测器的类型。标准可见光 PMT 的典型阈值为 ~ 1.5×10⁶ cps。
下面列出了一些避免饱和的技巧:
检查设置为大信号强度的激发和发射波长的信号水平。从窄光谱带宽开始,然后根据需要增加。
某些光谱仪(例如 FLS1000)具有用于激发源的衰减器,可以在不改变带通的情况下降低强度。
可以通过获取具有不同停留时间的光谱来研究饱和效应。峰值信号应与驻留时间呈线性关系。
荧光光谱仪器
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